詳細(xì)內(nèi)容

【產(chǎn)品名稱】豬瘟病毒通用型熒光RT-PCR 檢測試劑盒(熒光RT-PCR法)

【包裝規(guī)格】50T/盒

【預(yù)期用途】

  本試劑盒適用于檢測的扁桃體、淋巴結(jié)等組織病變部與健康部交界處組織、全血等標(biāo)本中豬瘟病毒通用型RNA，適用于豬瘟病毒通用型感染的輔助診斷。

【檢驗原理】

  本試劑盒采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術(shù)，通過設(shè)計一對禽豬瘟病毒通用型特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對豬瘟病毒通用型的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【使用方法】

一、試劑準(zhǔn)備（在試劑準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行）

1. 取出包裝盒中的各組分，室溫放置，待其完全融化，混勻后備用。

2. 根據(jù)待測樣本、陰性對照、陽性對照的數(shù)量，按下表1單反應(yīng)體系配制方法，取相應(yīng)量的試劑，充分混勻成PCR-Mix，按照20 μL/反應(yīng)分裝到PCR反應(yīng)管中，瞬時離心后備用。

表1：單反應(yīng)體系配制方法

二、樣本準(zhǔn)備（在樣本準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行）

1. 使用商品化的病毒核酸提取試劑盒，參照說明書進(jìn)行操作，提取好的核酸樣本如不能立即檢測，建議-70℃以下保存。

2. 取出樣本后混勻，將陰性對照、待測樣本、陽性對照各5 μL加入到PCR反應(yīng)管中混勻。

3. 蓋上管蓋，2000 rpm離心30。

4. 將PCR反應(yīng)管轉(zhuǎn)移到擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行上機(jī)。

三、PCR（在核酸擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行）

1. 將上述PCR反應(yīng)管按照實驗布局依次放入PCR儀對應(yīng)檢測孔內(nèi)，并記錄順序。

2. 按表2設(shè)置PCR擴(kuò)增循環(huán)參數(shù)。

表2：PCR擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)

【結(jié)果分析】

表3：結(jié)果分析表

【注意事項】

1. 使用本試劑盒的實驗室，應(yīng)嚴(yán)格按照國家有關(guān)基因擴(kuò)增檢驗實驗室管理規(guī)范進(jìn)行管理。

2. 各區(qū)域物品均為用，不得交叉使用，以免污染。檢測結(jié)束后，應(yīng)立即對工作臺進(jìn)行清潔消毒。

3. 吸取反應(yīng)液時，應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡。上機(jī)，應(yīng)注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊，以免液體蒸發(fā)造成結(jié)果不準(zhǔn)確。

4. 檢測過程中使用過的吸頭，應(yīng)直接打到盛有10%次氯酸的廢液缸內(nèi)，檢測結(jié)束的PCR反應(yīng)管，切忌開蓋，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。

5. 工作臺及各種實驗用品應(yīng)定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進(jìn)行消毒。

6. 試劑使用應(yīng)在常溫下充分融化并混勻。不同批號的試劑請勿混用，并在有效期內(nèi)使用。

【儲存條件與有效期】

試劑盒應(yīng)置于-20℃冷凍避光貯存；

試劑盒保存有效期為12個月；

試劑盒反復(fù)凍融次數(shù)不宜超過5次。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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