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技術(shù)文獻(xiàn)

細(xì)菌冷凍保存實(shí)驗(yàn)方法
閱讀次數(shù):979 發(fā)布時(shí)間:2022/5/9 9:43:02
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實(shí)驗(yàn)概要

速凍,是將樣品快速用干冰或液氮保存于-70°C或更低的溫度中。速凍能夠達(dá)到和緩慢控速冷凍相同的目的,效果大約為  -10-1000°C/min,但達(dá)不到-1°C  /分鐘。用CoolRack?液速凍樣本能夠保持樣本體積的穩(wěn)定、組織結(jié)構(gòu)完整、恒定的凍結(jié)參數(shù),快速免提樣本是能避免丟失或污染的樣品。在預(yù)冷CoolRack的提下進(jìn)行速凍,這能確保傳熱快。這種方法可以提供優(yōu)良的標(biāo)本的完整性和各類分析選擇,包括在研究和診斷中蛋白質(zhì)、DNA和RNA的提取。本實(shí)驗(yàn)提供長(zhǎng)時(shí)間冷凍細(xì)菌的常規(guī)方法。

主要試劑

細(xì)菌樣品

冷凍保護(hù)劑

TrueCoolTM冷凍管

主要設(shè)備

CoolBoxTM CFT30

CoolRack? CFT30

CoolRack?的CF

Cryolabels和/或cryomarkers

ThermalTrayHP平臺(tái)(可選)

CoolSinkTM BX50(可選)

37℃水浴鍋

-80℃冷凍冰箱

實(shí)驗(yàn)步驟

細(xì)菌樣品的準(zhǔn)備

遵照細(xì)菌的生長(zhǎng)和制備實(shí)驗(yàn)室的方法。

參照CDC(疾病控制和預(yù)防中心)的指導(dǎo)方針,特定病原體利用BSL標(biāo)準(zhǔn)(生物安全等)。病原體具有傳染性,應(yīng)在一個(gè)可控和安全的環(huán)境中操作。

細(xì)菌凍結(jié)

1.一般規(guī)則情況下,將制備的樣品保持在4°C。

2.將準(zhǔn)備好的細(xì)菌樣品中加入無(wú)菌甘油,使得樣品中甘油濃度為15-50%V/V。然后取1mL(或所需體積)分裝于預(yù)先標(biāo)記的TrueCool凍存管中。為了避免降低滴度,減少滴度將凍存管保持在CoolBox里CoolRackCFT30中,維持4°C。  CoolRackCFT30能降低由于單手開(kāi)關(guān)瓶蓋,造成的污染和泄漏事故。

3.當(dāng)細(xì)菌樣品在CoolRackCFT30維持4°C時(shí),將 CoolRackCF于干冰上平衡10分鐘。

4.將冷凍樣品轉(zhuǎn)移到一個(gè)儲(chǔ)物盒,并放置在-80°C冰箱長(zhǎng)期存放。

細(xì)菌解凍

1.將冷凍樣品從-80℃冰箱中拿出,放置于-12°C 的CoolBoxCFT30冷凍墨盒里,這樣可以保持合適的溫度和安全的傳遞樣品。

2.將凍存管放置在37℃水浴瓶中,慢慢幌動(dòng)小瓶,使其凍融。在整個(gè)液體完全解凍,將凍存管從37°C水浴瓶中拿出放在一個(gè)已經(jīng)在冰上平衡過(guò)的CoolRackCFT30上。樣品準(zhǔn)備好可供實(shí)驗(yàn)。

原創(chuàng)作者:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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