技術(shù)文獻
用轉(zhuǎn)染質(zhì)�；虿《厩秩镜姆椒▽�(gòu)建好的含靶基因的載體導(dǎo)入細胞，根據(jù)不同的基因載體中所含的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物進行篩選混合陽性克隆。在陽性混合克隆的基礎(chǔ)上，得到單細胞長出的陽性單克隆，繼而得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。常用的真核表達載體的抗性標(biāo)志物有嘌呤霉素（puromycin）、潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin）。
篩選穩(wěn)定細胞株的兩種方法
1、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，單克隆方法篩選穩(wěn)定細胞系
對大多數(shù)細胞轉(zhuǎn)染效率較低。對于基因過表達，如果轉(zhuǎn)染效率達到40%，基因過表達尚可。但是對于基因干擾實驗，對轉(zhuǎn)染效率要求遠遠高于基因過表達，通常質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無法滿足。
另外，質(zhì)粒游離于細胞質(zhì)中，很快降解，無法滿足較長時間的檢測項目；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染整合幾率低，穩(wěn)定細胞株構(gòu)建耗時耗力，且得率很低，往往需要挑取單克隆株。
2、病毒感染篩選穩(wěn)定細胞株
病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高/效，是目主流的穩(wěn)定細胞系篩選方法。用慢病毒制備穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株，由于其高/效整合、高/效轉(zhuǎn)錄、高/效表達、宿主范圍廣，感染效率高，且與細胞染色體整合而不發(fā)生基因重排，是制備穩(wěn)定細胞株的理想載體。
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株服務(wù)流程
1、載體構(gòu)建：將外源基因構(gòu)建到合適的載體上，如需病毒轉(zhuǎn)染，則包裝病毒。
2、篩選濃度測定：以 10-14 天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度。
3、細胞接種：轉(zhuǎn)染實驗天接種細胞，各種細胞的平板密度依據(jù)各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細胞應(yīng)達到 60%-80% 覆蓋。
4、細胞轉(zhuǎn)染：用構(gòu)建好的載體（或包裝好的病毒）轉(zhuǎn)染目的細胞。
5、抗生素篩選。
6、鑒定篩選結(jié)果。
終交付
1、病毒滴度檢測報告；穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株；
2、結(jié)題報告，包括詳細的實驗流程，測序結(jié)果和峰圖、引物序列、載體圖譜和滴度測定報告和q-P
原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司
請輸入要搜索的關(guān)鍵詞
上海遠慕生物科技有限公司：細胞凍存液,氨芐青霉素溶液,人白介素ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,顯色試劑盒,新生牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,牛血清白蛋白溶液,小鼠血漿,雞紅細胞,透明質(zhì)酸酶溶液,微生物培養(yǎng)基,胰蛋白酶儲存液,兩性霉素B溶液,LB冷凍緩沖液,ABTS試劑,磷酸酶抑制劑,EB緩沖液,熒光染色試劑盒,肥大細胞染色液,人源基因質(zhì)粒,胡蔓藤堿乙標(biāo)準(zhǔn)品,番茄紅素標(biāo)準(zhǔn)品，Pd-C-II標(biāo)準(zhǔn)品,知母皂苷E標(biāo)準(zhǔn)品,穿刺培養(yǎng)基,puc19質(zhì)粒,CPD抗凝劑,熒光抗體稀釋液
地址：上海市嘉定區(qū)曹安公路5588號 電話：021-58999639 傳真：021-58999639 技術(shù)支持：阿儀網(wǎng) 總訪問量：7635734
客服一
