在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，廣大科研工作者直飽受微生物污染的困擾，幾乎所有科研單位的細(xì)胞房都曾經(jīng)遭受過細(xì)菌、真菌、支原體、黑膠蟲的污染，尤其是些珍貴的細(xì)胞種子， 旦招惹上這幾個家伙，甚至面臨“絕種”的危險。針對細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)中面臨的普遍的問題，作為科研工作者的我們必須清楚認(rèn)識這些微生物，并通過技術(shù)手段判斷細(xì)胞遭受了哪種污染， 準(zhǔn)確的對癥下藥，才能為我們的細(xì)胞保駕護(hù)航。
1 細(xì)菌污染
1.1 細(xì)菌污染的鑒別
細(xì)菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)中常出現(xiàn)的污染類型，槍頭不小心碰到瓶壁、手不小心從培養(yǎng)瓶口處穿過、培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)瓶等等，不經(jīng)意的個小動作，都可能會造成細(xì)菌污染，以致于實驗功盡棄。 細(xì)菌污染在沒有爆發(fā)或培養(yǎng)體系中含有雙抗時，細(xì)菌污染較容易被科研工作者忽視，黑點(diǎn)在顯微鏡下穿而過，小黑點(diǎn)因為數(shù)量少且移動迅速而不易發(fā)現(xiàn)。隨著細(xì)菌在培養(yǎng)體系中的增多或者體系中撤掉雙抗以后，細(xì)菌可以從鏡下明顯識別，會呈現(xiàn)黑色條狀、棒狀、球狀， 培養(yǎng)基的外觀也會發(fā)生明顯的變化，培養(yǎng)基變渾濁，有細(xì)沙狀沉淀，有時會伴有臭味。
1.2 細(xì)菌污染的解決方式
般的細(xì)胞培養(yǎng)體系中，普遍采用雙抗或者三抗進(jìn)行細(xì)菌的預(yù)防，但這兩者存在定的局限性，比如只能預(yù)防，而不能拯救已經(jīng)細(xì)菌污染的細(xì)胞。另外，很多科研工作者從事原代的細(xì)胞分離和培養(yǎng)工作，在從動物身上取材并分離培養(yǎng)的過程中，易造成細(xì)菌污染，如果只是加入雙抗或三抗進(jìn)行沖洗組織，細(xì)菌污染無法避免，造成了珍貴動物組織的浪費(fèi)。
使用細(xì)胞污染高效清除劑
iCell 細(xì)胞污染高效清除劑，不僅兼具雙抗或三抗預(yù)防細(xì)菌的功效，還可以清除支原體污染，有效消除真菌和細(xì)菌的污染，只需 1-3 天就可顯著抑制支原體、真菌、細(xì)菌的增殖， 本產(chǎn)品經(jīng)過了上百種細(xì)胞的測試和長期的實驗驗證，完美兼具高效和廣譜清除細(xì)胞污染物的能力，對細(xì)胞生長幾乎無影響，大程度上挽救您的細(xì)胞。
2.真菌污染
2.1 真菌污染的鑒別
實驗室污染的真菌般為三類：念珠菌、酵母菌、霉菌，細(xì)胞污染真菌通常不易察覺，只有霉菌會逐漸出現(xiàn)細(xì)絲團(tuán)狀漂浮物，較容易從外觀發(fā)覺污染，其他真菌污染不像細(xì)菌污染培養(yǎng)基會渾濁，污染后培養(yǎng)液清澈透亮，與未污染的細(xì)胞從外觀上看無明顯變化。
在顯微鏡下比較容易判斷污染類型，念珠菌呈卵圓狀，在細(xì)胞周邊生長，酵母菌出芽生殖時有明顯的大小連體結(jié)構(gòu)，霉菌可觀察到菌體，菌絲呈絲狀、管狀、樹枝狀。
2.2 真菌污染的解決方式
真菌污染由于不容易通過培養(yǎng)基的變化來判斷，般發(fā)現(xiàn)時就是已經(jīng)爆發(fā)了，鏡下會出現(xiàn)明顯團(tuán)狀或黑色絲狀污染物，細(xì)胞狀態(tài)明顯變差，很難救活。傳統(tǒng)的預(yù)防真菌污染的方式為培養(yǎng)體系中加入三抗，但是旦發(fā)生真菌污染，三抗對于明顯的真菌污染就顯得心有余而力不足，此時建議如果是還留存種子的細(xì)胞就立刻扔掉，徹底消毒滅菌細(xì)胞房和 CO2 培養(yǎng)箱，扔掉可能被污染的培養(yǎng)基，對用過的實驗器材進(jìn)行滅菌。
使用真菌清除劑
真菌清除劑用于防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中的真菌（包括酵母）污染，還可用于消除細(xì)胞培養(yǎng)物中的真菌（含酵母）污染。療效遠(yuǎn)超真菌抗生素兩性霉素 B，對細(xì)胞培養(yǎng)過程中的真菌污染，如白色念珠菌、曲霉、酵母有很好的療效。
真菌清除試劑經(jīng)過了上百種細(xì)胞的測試和長期的實驗驗證，只需 1-3 天就可以抑制真菌增長。對細(xì)胞基本無害，具有高效、特異性殺滅的特點(diǎn)，大程度上挽救珍貴的細(xì)胞，減少真菌污染帶來的損失。
3 黑膠蟲污染
3.1 黑膠蟲污染的鑒別
“黑膠蟲”是種常見的細(xì)胞污染物，與細(xì)胞共生，隨細(xì)胞傳代而傳代。“黑膠蟲”與細(xì)胞競爭性生長，對細(xì)胞生長不利，嚴(yán)重時導(dǎo)致細(xì)胞死亡。目很多細(xì)胞存在被“黑膠蟲”污染的現(xiàn)象，對細(xì)胞培養(yǎng)及其后續(xù)實驗造成了大地影響。
“黑膠蟲”污染的細(xì)胞常見的特性有以下幾點(diǎn)：
（1）培養(yǎng)基不渾濁，但在顯微鏡下觀察細(xì)胞時，細(xì)胞周圍和培養(yǎng)液中有很多“小黑點(diǎn)”， 且隨著培養(yǎng)時間的延長“小黑點(diǎn)”逐漸增多，更換培養(yǎng)液或洗滌細(xì)胞不能將其去除；
（2）“黑膠蟲”污染的細(xì)胞，營養(yǎng)消耗快，需要頻繁更換培養(yǎng)液；
（3）“黑膠蟲”污染的細(xì)胞生長緩慢，細(xì)胞狀態(tài)差，空泡化嚴(yán)重，甚至還可能導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)的改變。
3.2 黑膠蟲污染的解決方式
對于黑膠蟲污染的細(xì)胞，為快速有效的處理方式就是采用黑膠蟲清除劑對黑膠蟲進(jìn)行清除，同時確保培養(yǎng)體系中的血清必須為無黑膠蟲和原蟲污染的優(yōu)質(zhì)血清。
使用黑膠蟲清除劑
黑膠蟲清除試劑用于清除細(xì)胞培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的“黑點(diǎn)”，只需 1-3 天就可以顯著抑制“黑點(diǎn)”生長，周左右即可清除“黑點(diǎn)”。
本產(chǎn)品經(jīng)過了上百種細(xì)胞的測試和長期的實驗驗證，對細(xì)胞生長無明顯影響，具有高效、特異性殺滅的特點(diǎn)，可顯著清除黑膠蟲污染，大程度上挽救珍貴的細(xì)胞。
4 支原體污染
4.1 支原體污染的鑒別
支原體直徑約為 0.1-0.3 μm，具有變形能力，可透過常見過濾膜（0.22-0.45 μm），因此常規(guī)的無菌過濾方法不能將其去除，常用的抗生素也對支原體無效。
支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)域的個性問題，各國細(xì)胞系支原體污染的平均比例為 30-60%。支原體可通過細(xì)胞之間交叉污染，操作人員的口腔、皮膚造成污染，或者血清等添加物而帶入污染。
支原體在光學(xué)顯微鏡下不可見，般不會引起培養(yǎng)物混濁，因此細(xì)胞被支原體污染般難以察覺。
支原體會消耗必須氨基酸，影響細(xì)胞生長速率，促進(jìn)代謝物積累，改變細(xì)胞形態(tài)，影響 DNA、RNA 以及
蛋白質(zhì)的合成，抑制細(xì)胞因子表達(dá)，改變被污染細(xì)胞的基因表達(dá)譜，誘導(dǎo)染色體畸變。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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