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近年來，活細胞成像活躍于生物學的各個領(lǐng)域。在它的加持下，研究者們可以實時或者在一段時間內(nèi)觀察細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)和細胞生理過程，從而加深對細胞運作過程的認識。但在各種實驗操作和成像條件下，想要成功做好活細胞成像實驗并不容易。

1、實驗前我們先了解一下，什么是活細胞成像，它有哪些作用？

通常，我們把使用延時成像技術(shù)開展活細胞研究簡稱為「活細胞成像」。通過活細胞成像技術(shù)，可以研究靶標參與的動態(tài)生命過程，酶活性、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白與受體轉(zhuǎn)運以及膜的再循環(huán)過程（內(nèi)吞與胞吐）等動態(tài)進程都可實現(xiàn)檢測。

2、我們在實驗中又應(yīng)該注意些什么？

眾所周知，活細胞需保持在天然的生理條件范圍內(nèi)，包括 pH、溫度、O 2 水平和滲透壓等等，維持細胞的健康和功能活性十分重要。

所以，實驗設(shè)計和操作過程中需特別注意：

須通過特定方法實現(xiàn)以*小毒性標記靶標——無論是靶分子、細胞功能還是細胞狀態(tài)；

活細胞通常很難允許某些大的檢測分子通過；

移動的觀察目標更難保持聚焦；

使用的檢測技術(shù)是否對活細胞有損傷。

當然，隨著實驗需求不斷變化，需要注意的點也會有所不同。

舉例來說，研究細胞生長與細胞分裂的實驗可能與研究受體激活等實驗就具有明顯不同的需求。

一些強健的永生化細胞系能在無專門環(huán)境控制的條件下忍受短時成像；

在某些短時成像實驗中，使用較大的培養(yǎng)基體積可避免由于揮發(fā)所導(dǎo)致的滲透壓和含氧量變化問題；

而對于長時成像研究，除了在培養(yǎng)基中添加碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)外，使用帶有加熱模塊可控制溫度、濕度與 CO 2 的小培養(yǎng)室或大溫控箱來精-確控制環(huán)境也十分重要。

隨著活細胞成像的普及，對實驗中熒光基團標記的要求也越來越高，活細胞成像實驗如何實現(xiàn)更好的熒光標記？ 一起奉上如下注意事項：

如需長時間曝光，請盡量選擇用更長波長的熒光試劑，長波長試劑只需較低的激發(fā)功率，具有更低的光毒性，可以提供更健康的細胞狀態(tài)；

推薦針對特定的檢測讀值、光譜兼容性和信噪比對染色進行優(yōu)化；

去除標記溶液，并使用新鮮配制的培養(yǎng)基沖洗，可減少背景熒光；

搭配多種熒光基團實現(xiàn)多重標記，推薦使用熒光光譜查看器，以確保熒光染料間光譜重疊*小。
 

原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司