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技術(shù)文獻(xiàn)

臺盼藍(lán)使用最佳濃度及時間是多少?
閱讀次數(shù):4705 發(fā)布時間:2019/12/12 9:47:24
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問: 現(xiàn)在剛剛開始做干細(xì)胞,想自己計數(shù)白細(xì)胞,用的是Sigma的0.4%臺盼藍(lán),1:1混合,從2分鐘開始細(xì)胞死亡越來越多,例如2分時有10%死亡,到5分鐘就死一半了,到底是幾分鐘計數(shù)*準(zhǔn)確呢?& 還有一個問題,看到有1:1使用,也有1:9的,用哪種濃度呢?

答1 :0.4%應(yīng)該是1:1混合的,1:9的是4%濃度的,這個染色的時間不應(yīng)該太長的,因為對于胎盤藍(lán)這種大分子,不能滲透就如細(xì)胞膜,但是如果染色時間過長,會因為胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞里,所以時間長了之后看到很多細(xì)胞都是藍(lán)色,不一定是細(xì)胞死了,可能是臺盼藍(lán)進(jìn)去了,我們一般混合一下就在顯微鏡下看了,要是死細(xì)胞,細(xì)胞膜有破裂,細(xì)胞很快就藍(lán)了。

答2: 采用細(xì)胞計數(shù)儀計數(shù),這樣可以快速有效的將單位體積的總細(xì)胞數(shù)、活細(xì)胞數(shù)、死細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞活性直接讀出,如果用目測法只能將細(xì)胞總數(shù)大致估計出。

答3 : 3分鐘內(nèi)觀察,是和細(xì)胞混一下就滴出來觀察,大于3分鐘活細(xì)胞也會被染上不準(zhǔn)的

答4 : 臺盼藍(lán)母液是0.4%, 用的時候1:10稀釋使用(1:1使用的話細(xì)胞受不了的),5分鐘之內(nèi)數(shù)完。
還有就是評判細(xì)胞的死活時,染成藍(lán)色或者鏡下不透亮的細(xì)胞都是死細(xì)胞!

答5: 混合后要在3分鐘內(nèi)計數(shù)完畢,要不然細(xì)胞死的越來越多,結(jié)果不準(zhǔn)。如果時間上來不及的話,可以先在顯微鏡下拍照再計數(shù)。

原創(chuàng)作者:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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