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技術(shù)文獻

遠慕生物：過氧化氫酶的活性測定實驗
閱讀次數(shù)：1290 發(fā)布時間：2018/11/5 9:39:53

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    實驗方法原理：H2O2在240 nm波長下有強烈吸收，過氧化氫酶能分解過氧化氫，使反應(yīng)溶液吸光度（A240）隨反應(yīng)時間而降低。根據(jù)測量吸光率的變化速度即可測出過氧化氫酶的活性。

    實驗步驟：

    一、儀器與用具

    紫外分光光度計；離心機；研缽；250ml容量瓶1個；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml試管3支；恒溫水��；

    二、試劑

    0.2mol/L pH7.8磷酸緩沖液（內(nèi)含1%聚乙烯吡咯烷酮）；

    0.1mol/L H2O2（用0.1mol/L高錳酸鉀標定）。

    三、方法

    1. 酶液提�。悍Q取新鮮小麥葉片或其它植物組織0.5g置研缽中，加入2～3ml 4℃下預(yù)冷的pH7.0磷酸緩沖液和少量石英砂研磨成勻漿后，轉(zhuǎn)入25ml容量瓶中，并用緩沖液沖洗研缽數(shù)次，合并沖洗液，并定容到刻度。混合均勻?qū)⒘科恐?℃冰箱中靜置10min，取上部澄清液在4000rpm下離心15min，上清液即為過氧化氫酶粗提液。5℃下保存?zhèn)溆谩?br />
    2. 測定：取10ml試管3支，其中2支為樣品測定管，1支為空白管，按表40-2順序加入試劑。

    紫外吸收法測定H2O2樣品液配置表

25℃預(yù)熱后，逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2，每加完一管立即記時，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下測定吸光度，每隔1min讀數(shù)1次，共測4min，待3支管全部測定完后，按下式計算酶活性。

3.結(jié)果計算：以1min內(nèi)A240減少0.1的酶量為1個酶活單位（u）