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AMPPD 發(fā)光顯色試劑盒 

產(chǎn)品簡介： 

    AMPPD 是堿性磷酸酶的化學(xué)發(fā)光底物，在適宜的緩沖液中，隨著酶的催化水解作用，

AMPPD 分解成 AMP-D，后者發(fā)出強(qiáng)度很高的光信號(hào)，其發(fā)光的速度取決于堿磷酶的濃度。

當(dāng)堿磷酶偶合到雜交的探針時(shí)，便可以通過此系統(tǒng)檢測(cè)到雜交分子的存在量。乙醇胺可使光信號(hào)輸出更理想。AMPPD 為 1，2-二氧環(huán)已烷衍生物，它是一種生物化學(xué)領(lǐng)域中*新的超

靈敏的堿性磷酸酶底物，其特點(diǎn)：反應(yīng)速度快，在很短時(shí)間內(nèi)提供正確可靠的結(jié)果。在它的

分子結(jié)構(gòu)中有兩個(gè)重要部分，一個(gè)是聯(lián)接苯環(huán)和金剛烷的二氧四節(jié)環(huán)，它可以斷裂并發(fā)射光子；另一個(gè)是磷酸根基團(tuán)，它維持著整個(gè)分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。在通常情況下，這種化合物很穩(wěn)定。但是，結(jié)果有堿性磷酸酶存在，Dioxetane Phosphate 作為酶的底物會(huì)在酶的催化一

脫去磷酸根基團(tuán)，形成一個(gè)不穩(wěn)定的中間體。 這個(gè)中間體隨即自行分解 （二氧四節(jié)環(huán)斷裂） ，同時(shí)發(fā)射光子。 

    AMPPD 發(fā)光顯色試劑盒適用于 PVDF 膜，不推薦用于硝酸纖維素膜。 

產(chǎn)品組成：

自備材料： 

1、轉(zhuǎn)印了蛋白并已以抗體-酶復(fù)合物檢測(cè)過的 PVDF 膜 

2、Tris 鹽緩沖液（TBS） 

3、透明的塑料保鮮膜 

4、蒸餾水 

操作步驟（僅供參考）： 

    1、 臨用前，取適量的 A1 和 A2，等量混合后獲得 Dioxetane Buffer。 

    2、 按 2.5mgAMPPD 溶于 25ml Dioxetane Buffer, 配制 0.1mg/ml AMPPD 底物溶液即

為 AMPPD Dioxetane Buffer（發(fā)色發(fā)光顯跡液），用于膜的染色。 
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3、 取適量 Dioxetane Buffer 洗膜兩次，每次 15min。 

4、 對(duì)于 PVDF 膜進(jìn)行的堿性磷酸酶反應(yīng), 膜置于新鮮配制的 AMPPD Dioxetane Buffer 

作用 5min。 

5、 將膜移入適量的 AMPPD Dioxetane Buffer 中，浸泡 5min（AP 反應(yīng)）。 

6、 取出 PVDF 膜，滴干水分，將膜正面朝下放在一張透明的塑料保鮮膜上，向后折疊將膜

包裹起來，成為不漏水的封閉體。 

7、 在暗房中，將膜正面朝下放在感光膠片上，曝光數(shù)秒至數(shù)小時(shí)。 

8、 如需要，在室溫下以適量的 TBS 洗膜 15min。 

9、 將膜放入 AMPPD Dioxetane Buffer，條帶應(yīng)在 10~30min 內(nèi)出現(xiàn)。 

10、用蒸餾水洗膜，終止反應(yīng)。晾干后拍照留永久的記錄。 

注意事項(xiàng)：  

1、 PVDF 膜置于膠片上后，不要改變位置。 

2、 曝光時(shí)間應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況，自行摸索。 

3、 配制好的 AMPPD Dioxetane Buffer，應(yīng)避光低溫保存。 

4、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 

有效期： 12 個(gè)月有效。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司